Produk
Kit Deteksi SARS-Cov-2-RT-PCR Lifecosm kanggo 2019-nCoV
Panggunaan samesthine
Kit iki digunakake kanggo deteksi kualitatif koronavirus anyar (2019-nCoV) nggunakake swab tenggorokan, swab nasofaring, cairan lavage bronchoalveolar, sputum. Asil deteksi produk iki mung kanggo referensi klinis, lan ora mung digunakake bukti kanggo diagnosa klinis lan perawatan.Analisis lengkap kondisi dianjurake ing kombinasi karo manifestasi klinis pasien lan tes laboratorium liyane.
Prinsip inspeksi
Kit kasebut adhedhasar teknologi RT-PCR siji-langkah.Nyatane, 2019 coronavirus anyar (2019-nCoV) ORF1ab lan gen N dipilih minangka wilayah target amplifikasi.Primer spesifik lan probe fluoresensi (probe gen N dilabeli FAM lan probe ORF1ab dilabeli HEX) dirancang kanggo ndeteksi RNA coronavirus tipe anyar 2019 ing conto.Kit kasebut uga kalebu sistem deteksi kontrol internal endogen (probe gen kontrol internal kanthi label CY5) kanggo ngawasi proses pengumpulan sampel, amplifikasi RNA lan PCR, saéngga nyuda asil negatif palsu.
Komponen utama
| Komponen | Volume(48T/Paket） |
| solusi reaksi RT-PCR | 96 l |
| nCOV primer TaqMan probemixture（ORF1ab,N Gen,RnaseP Gen） | 864l |
| Kontrol negatif | 1500µl |
| nCOV Kontrol positif (l ORF1ab N Gen) | 1500µl |
Reagen dhewe: ekstraksi RNA utawa reagen pemurnian.Kontrol negatif/positif: Kontrol positif yaiku RNA sing ngemot fragmen target, dene kontrol negatif yaiku banyu tanpa asam nukleat.Sajrone nggunakake, kudu melu ekstraksi lan kudu dianggep infèksius.Dheweke kudu ditangani lan dibuwang miturut peraturan sing cocog.
Gen referensi internal yaiku gen RnaseP manungsa.
Kahanan panyimpenan lan tanggal kadaluwarsa
-20 ± 5 ℃, supaya pembekuan bola lan thawing luwih saka 5 kaping, bener kanggo 6 sasi.
Instrumen sing ditrapake
Kanthi FAM / HEX / CY5 lan instrumen PCR neon multi-saluran liyane.
Syarat spesimen
1. Jenis spesimen yang berlaku: swab tenggorokan, swab nasofaring, cairan lavage bronchoalveolar, sputum.
2. Pengumpulan spesimen (teknik aseptik)
Swab pharyngeal: Ngusap amandel lan tembok pharyngeal posterior nganggo rong swab bebarengan, banjur celupake sirah swab ing tabung uji sing ngemot larutan sampling.
Sputum: Sawise pasien ngalami batuk sing jero, kumpulake sputum sing batuk ing tabung uji tutup sekrup sing ngemot larutan sampling;cairan lavage bronchoalveolar: Sampling dening profesional medis.3.Panyimpenan lan transportasi sampel
Spesimen kanggo isolasi virus lan tes RNA kudu dites sanalika bisa.Spesimen sing bisa dideteksi sajrone 24 jam bisa disimpen ing suhu 4 ℃;sing ora bisa dideteksi ing 24
jam kudu disimpen ing -70 ℃ utawa ngisor (yen ora ana kondisi panyimpenan saka -70 ℃, padha kudu
sementara disimpen ing -20 ℃ kulkas).Spesimen kudu nyegah pembekuan lan thawing bola-bali sajrone transportasi.Spesimen kudu dikirim menyang laboratorium sanalika bisa sawise koleksi.Yen conto kudu diangkut ing jarak sing adoh, dianjurake kanggo nyimpen es garing.
Metode Tes
1 Pengolahan sampel lan ekstraksi RNA (area pangolahan sampel)
Dianjurake kanggo njupuk 200μl sampel Cairan kanggo extraction RNA.Kanggo langkah ekstraksi sing gegandhengan, waca instruksi kit ekstraksi RNA komersial.Loro-lorone negatif lan negatif
kontrol ing kit iki melu extraction.
2 Preparasi reagen PCR (reagen preparation area)
2.1 Copot kabeh komponen saka kit lan thaw lan nyampur ing suhu kamar.Centrifuge ing 8.000 rpm kanggo sawetara detik sadurunge digunakake;ngitung jumlah reagen sing dibutuhake, lan sistem reaksi disiapake kaya sing ditampilake ing tabel ing ngisor iki:
| Komponen | N porsi (sistem 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| solusi reaksi RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = jumlah sampel sing diuji + 1 (kontrol negatif) + 1 (nCOVkontrol positif) | |
2.2 Sawise nyampur komponen, centrifuge kanggo wektu cendhak supaya kabeh Cairan ing tembok tabung tiba ing ngisor tabung, lan banjur aliquot sistem amplifikasi 20 μl menyang tabung PCR.
3 Sampling (area persiapan spesimen)
Tambah 5μl saka kontrol negatif lan positif sawise extraction.RNA saka sampel sing bakal diuji ditambahake menyang tabung reaksi PCR.
Tutup tabung kasebut kanthi kenceng lan centrifuge ing 8.000 rpm sawetara detik sadurunge ditransfer menyang area deteksi amplifikasi.
4 amplifikasi PCR (area deteksi diperkuat)
4.1 Selehake tabung reaksi ing sel sampel instrumen, lan atur paramèter kaya ing ngisor iki:
| tataran | Sepeda; Pit; ontel nomer | Suhu(°C) | Wektu | koleksisitus |
| mbalikketranskripsi | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pra-denaturasin | 1 | 95 | 1 min | - |
| Sepeda; Pit; ontel | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | pangumpulan data |
Pilihan saluran deteksi instrumen: Pilih saluran FAM, HEX, CY5 kanggo sinyal fluoresensi.Kanggo referensi neon NONE, aja milih ROX.
5 Analisis asil (Mangga deleng instruksi eksperimen saben instrumen kanggo setelan)
Sawise reaksi, simpen asil.Sawise analisis, nyetel nilai wiwitan, nilai pungkasan, lan nilai batesan garis dasar miturut gambar (pangguna bisa nyetel miturut kahanan nyata, nilai wiwitan bisa disetel dadi 3 ~ 15, nilai pungkasan bisa disetel menyang 5~20, imbuhan) ing grafik logaritma Ing ambang jendhela, garis ambang ana ing fase logaritma, lan kurva amplifikasi kontrol negatif minangka garis lurus utawa ing ngisor garis ambang).
6 Kontrol Quauty (Kontrol prosedural kalebu ing tes) Kontrol negatif: Ora ana kurva amplifikasi sing jelas kanggo saluran deteksi FAM, HEX, CY5
Kontrol positif COV: kurva amplifikasi sing jelas saka saluran deteksi FAM lan HEX, Ct value≤32, nanging ora ana kurva amplifikasi saluran CY5;
Persyaratan ing ndhuwur kudu ditindakake bebarengan ing eksperimen sing padha;yen ora, eksperimen ora bener lan kudu diulang.
7 Penentuan asil.
7.1 Yen ora ana kurva amplifikasi utawa nilai Ct> 40 ing saluran FAM lan HEX saka sampel tes, lan ana kurva amplifikasi ing saluran CY5, bisa ditemtokake manawa ora ana coronavirus anyar 2019 (2019-nCoV) RNA ing sampel;
.2 Yen sampel tes duwe kurva amplifikasi sing jelas ing saluran FAM lan HEX, lan nilai Ct yaiku ≤40, bisa ditemtokake manawa sampel kasebut positif kanggo coronavirus anyar 2019 (2019-nCoV).
7.3 Yen sampel tes duwe kurva amplifikasi sing jelas mung ing siji saluran FAM utawa HEX, lan nilai Ct ≤40, lan ora ana kurva amplifikasi ing saluran liyane, asil kasebut kudu dites maneh.Yen asil tes ulang konsisten, sampel bisa dianggep positif kanggo sing anyar
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Yen asil tes maneh negatif, bisa ditemtokake manawa sampel kasebut negatif kanggo coronavirus anyar 2019 (2019-nCoV).
Nilai pertimbangan positif
Metode kurva ROC digunakake kanggo nemtokake nilai referensi CT saka kit lan nilai referensi kontrol internal yaiku 40.
Interpretasi asil tes
1.Saben eksperimen kudu dites kanggo kontrol negatif lan positif.Asil tes mung bisa ditemtokake nalika kontrol memenuhi syarat kontrol kualitas
2. Nalika saluran deteksi FAM lan HEX positif, asil saka saluran CY5 (saluran kontrol internal) bisa uga negatif amarga kompetisi sistem.
3. Nalika asil kontrol internal negatif, yen tabung test kang FAM lan saluran deteksi HEX uga negatif, iku tegese sistem dipatèni utawa operasi salah, t test ora bener.Mulane, sampel kudu dites maneh.
